产品名称                      单位       货号

M5 植物组织直接PCR试剂盒       100T    MF284-01

M5 植物组织直接PCR试剂盒       500T    MF284-05

【储存条件】

2x DirectAmp PCR Mix -20℃ 保存，避免反复冻融次数过多，3周内短时间使用可放4℃保存。

其余常温或者4℃保存，有效期12个月。

【产品简介】

本制品采用独特的裂解缓冲液快速裂解植物组织，释放的DNA无需纯化便可以作为模板，用高度耐抑制物的2x DirectAmp PCR Mix扩增，扩增产物可直接上样电泳。适用范围：简单非多糖、多酚植物。特点：简单，高通量筛选；一般扩增大小<2kb。

【产品组分】

                        MF284-01      MF284-05

Stock A                    0.5ml           2.5ml

Stock B                     1ml             5ml

Buffer N              5 ml       25 ml

2x DirectAmp PCR Mix        1 ml      5 ml

ddH₂O (PCR grade)             10 ml               50ml

【使用方法】

1. 配制即用裂解液：按照5μl Stock A+ 10μl Stock B+ 85μl ddH₂O = 100μl 比例配制成即用裂解液。每个样品需要50μl即用裂解液，具体量可以根据样品数量按照比例放大配制即可。

2. 取50μl裂解液于0.2 mL PCR薄壁管中（没有PCR仪器者也可以用0.5ml离心管）。然后置测试材料叶片（一般20mm²左右，可剪成3/4条放入）与裂解液中（也可以用吸头戳几下帮助裂解），吹打或者涡旋混匀，确保叶片碎块浸没在裂解液内。

3. 98℃裂解30min（建议PCR仪上操作），根据情况裂解时间可以在15分钟-1小时内调整。

4. 取出离心管迅速放冰上，加入50μl Buffer N，混匀，即可直接用做PCR模板或置于4℃或-20℃保存。

5. PCR扩增：

建议PCR条件(以20 μl反应体系为例)

PCR 循环

95℃      5-10 min

94℃      30 sec

54-60℃   30 sec 35-40 cycles

72℃      1 kb/min

72℃      5-10 min

【注意事项】

1. 如果扩增条带较弱，可以适当增加减少模板加入量，裂解混合物模板一般可以在0.5μl-2μl内调节，但是注意一般不能超过4μl，加入太多，反而抑制PCR反应。
2. 如果样品多酚多糖较多，扩增效果不理想，可在20 μl PCR反应体系加入2μl 10%PVP40改善效果。
3. 如果非特异扩增较多，可调整退火温度，或者适当增减模板用量。
4. 各溶液使用完毕后，应该立刻盖紧盖子，以免PH改变影响质量。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。