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M5 GC Enhancer GC增强剂使用说明书

产品名称                  单位           货号

M5 GC Enhancer GC增强剂    1ml    MF278-01

【储存条件】

长期保存，请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用应适量分装，避免污染。

【产品简介】

PCR Enhancers能够促进各种耐热DNA聚合酶对许多复杂结构的DNA模板（如高GC含量）的有效扩增，增加PCR反应的灵敏度和特异性。其原理可能是通过提高DNA聚合酶的热稳定性，降低模板DNA的二级结构等机制提高目的片段的产量。本产品适合于灵敏度要求较高的PCR、RT-PCR、Multiplex PCR、PCR条件的优化和GC含量高的DNA片段的扩增。由于其作用机制不同，使用不同的模板、引物时，GC Enhancer提高目的片段产量的效果存在差异，因此建议先摸索出合适的GC Enhancer及其添加浓度后再进行PCR扩增。

【使用方法】

由于不同的引物对模板的来源、退火温度等条件存在选择性，建议使用时首先配好并分装 PCR 反应体系，然后向 PCR 反应

体系中加入不同体积的 GC Enhancer（如 0，1，2，4，6 μl），再按常规 PCR 条件进行反应，以寻找最佳的 GC Enhancer

及其添加浓度后再进行 PCR 扩增。

摸索最佳GC Enhancer 的添加浓度

1． 按需求配制数管 50 μl PCR 反应：

DNA模板*                             1 μl

10 x X5 PCR buffer                      2 μl

2 mM dNTP mix                         2 μl

正向引物 (10 μM)                       0.4 μl

反向引物 (10 μM)                       0.4 μl

X5 DNA polymerase (1 U/μl )            0.4-0.8 μl

ddH₂O                             补足至20 μl

*模板量：10~1000 ng 基因组 DNA，1~30 ng 质粒，或 1~2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。

依次加入不同体积的 GC Enhancer ，如 1μl、2μl、4 μl、6 μl 等。

PCR 反应条件的设置：

95℃ 2 min

25~35 循环

94℃ 25 sec

55~65℃ 25 sec

68℃ 0.5 min/1 kb

68℃ 5 min

B．以摸索出来的最佳 GC Enhancer 浓度条件进行新的一轮 PCR 扩增。

注意：以上举例为常规 PCR 反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段

的大小，碱基序列和引物长短等具体情况，设定最佳反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系。

【注意事项】

1．绝大多数 GC Enhancer 都会降低 DNA 聚合酶的保真性能和特异性，因此在产量可接受的前提下，尽量选择添加最少量的 GC Enhancer，必要时可采用提高特异性的措施如 hotstart 或slowdown 技术等。

2．任何一种 GC Enhancer 都不可能解决所有 PCR 扩增遇到的困难，这是由于 PCR 受多种因素影响造成的。在 PCR 扩增

遇到困难时，应先通过设立对照实验，确定问题所在，然后判断不同浓度的 GC Enhancers 是否可能有帮助。 

【适用范围】

灵敏度要求较高的 PCR、RT-PCR、Multiplex PCR、PCR 条件的优化和 GC 含量高的 DNA 片段的扩增。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。