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W5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase (with dNTPs) (W5热启动酶)
货号 规格 销售价
MF169-01 100U 698.00
MF169-05 5x100U (500ul) 2880.00
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    X5 Hot Start High-Fidelity DNA

    Polymerase ( with dNTPs使用说明书

     

     

    产品名称                            单位      货号

    X5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase  100U    MF169-01

    X5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase  5×100U  MF169-05

     

    储存条件

    长期保存,请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。

     

    产品简介

    聚合美X5热启动超保真DNA聚合酶采用独特的核酸适配体修饰,非共价结合聚合酶从而在非循环反应中封闭聚合酶的活性,因此可以在常温条件下配制反应体系。X5超保真酶具有5’ 到3’ DNA 聚合酶活性和3’ 到5’ 的外切酶活性(即校读活性),能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象,在标准缓冲液中其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的50倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。同时该酶还具有快速的DNA合成速度,约相当于普通Taq DNA Polymerase的4-6倍、Pfu DNA Polymerase的8-12倍。该酶合成能力很强,即使是复杂的模板,也能快速准确的完成反应,尤其适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增,如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等,也可用于DNA片段的末端补平。使用聚合美X5超保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物无3'端突出碱基,不可直接用于TA克隆,可以直接连入聚合美特制的平末端TOPO克隆载体(货号MF021和MF022)。

     

    单位定义

    用大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74˚C、30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量。

     

    产品组份

    X5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase (1U/μl)         100 μl

    10× X5 PCR Buffer                         1.0 ml

    25mM MgSO4                               1.0 ml

    2mM dNTPs                                1.0 ml

     

    【质量控制】

    以λ DNA为模板,能有效扩增20 kb的DNA片段;以基因组DNA为模板,能有效扩增单拷贝基因;无内切酶和外切酶污染。

     

    适用范围

    热启动扩增,高保真扩增,长片段的快速扩增,如基因克隆、定点突变等;高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增。

     

    操作示例

    按下表配制PCR反应体系:

    10× X5 PCR Buffer                       

    2.5 μl

    25mM MgSO4

    2.5 µl

    2mM dNTPs

    2.5 µl

     Primer 1 (10 μM)                      

    0.5 µl

     Primer 2 (10 μM)                    

    0.5 µl

    Template DNA*

    10-200ng

    X5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase

    0.5µl

     ddH2O补足至

    25 µl

     

    建议的PCR条件

     

    95°C

    2 min.

    32-36 cycles of:

     

    94°C

    15 sec.

    53–64°C

    15-20sec.

    68°C

    15-30sec./1kb  

    68°C

    5 min.

    4°C

    forever

                                            

    <*模板量:10~200 ng 基因组 DNA,10~30 ng 质粒,或 1~2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。以上举例为常规 PCR 反应系统,仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系>。

     

     

     

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。