M5 “长又亮”超保真酶（单酶，不带其他组分）

使用说明书

产品名称                                   单位         货号

M5 “长又亮”超保真酶（单酶，不带其他组分）   100U       MF989-01

M5 “长又亮”超保真酶（单酶，不带其他组分）   5x100U     MF989-05

【储存条件】

长期保存，请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，可置于4˚C保存至少六个月。

【产品简介】

聚合美Magic Neo超保真DNA聚合酶在Magic超保真酶系列技术基础上，应用了聚合美特制的<延伸增强剂>，抑制<PCR停滞现象>，不仅保持了Magic超保真酶的高保真性，更明显提高了对粗样品模板的扩增效率。Magic Neo具有5’ 到3’ DNA 聚合酶活性和3’ 到5’ 的外切酶活性(即校读活性)，能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象，在标准缓冲液中其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的50倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。同时该酶还具有快速的DNA合成速度，约相当于普通Taq DNA Polymerase的4-6倍、Pfu DNA Polymerase的8-12倍。该酶合成能力很强，即使是复杂的模板，也能快速准确的完成反应，尤其适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增，如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等，也可用于DNA片段的末端补平。使用聚合美Magic Neo超保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物无3’ 端突出碱基，不可直接用于TA克隆，可以用聚合美特制的平末端TOPO克隆（货号MF021和MF022）。

【单位定义】

用大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74˚C、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量。

【产品组份】

M5 “长又亮”超保真酶（单酶，不带其他组分）  (1U/μl)        100 μl

【质量控制】

以λ DNA为模板，能有效扩增20 kb的DNA片段；以基因组DNA为模板，能有效扩增单拷贝基因；无内切酶和外切酶污染。

【适用范围】

高保真扩增，长片段的快速扩增，如基因克隆、定点突变等；高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增；粗样品的直接扩增。

<*模板量：10~200 ng 基因组 DNA，10~30 ng 质粒，或 1~2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。以上举例为常规 PCR 反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系>。

注意：大部分条件下，退火温度不需要特殊设置；在个别难扩的情况下，按Tm+3会有改善！

【常见问题解答（FAQ）】

Q1：我以cDNA做模板，为何扩增不到条带？

A1：以cDNA做模板，扩增不到条带的可能原因如下：

• 提取的RNA质量不好，部分或者完全降解，导致反转录得到的cDNA模板也是部分截断序列或者完全没有序列。模板质量不好，PCR扩增自然就失败了。
• 目标基因在所提取组织中没有表达，或者表达量极低，导致反转录得到的cDNA中没有或者极微量的模板，在常规PCR循环数比如35个循环的条件下，扩增不到能够检测的条带。

解决方案：以基因组DNA做模板，做个正对照（如果有内含子，要适当加大延伸时间）。

如果正对照能扩增出来，就说明超保真酶和引物没有问题，是cDNA模板的问题，需要重新提取RNA做反转录。

如果正对照也没有扩增出来，那有可能是引物降解或者引物失效的原因，重新合成引物。

Q2：我的片段比较特殊，局部区域GC含量>80%，用了很多品牌的超保真酶都没有扩增出来，怎么办？

A2：对于高GC片段的扩增，除了做好正对照，排除引物和模板的原因，更需要摸索退火温度和PCR程序，采用touchdown程序有时会有改善，PCR体系中额外添加DMSO或者甜菜碱可能会有改善。此外，把延伸速度降下来，可能会对结果有所改善。

Q3：如果我的是粗提样本做模板，怎么办？

A3：对于粗提物做模板，需要将PCR速度降下来，比如正常是4-6kb/min，现在要降到1-2kb/min，对PCR成功率有很大改善。

Q4：如果我的片段很长（>10kb），PCR程序该怎么设置？

A4：对于超长片段扩增，PCR程序其他地方不需特别注意，只要注意议延伸速度比正常稍微慢点，但是比粗提物做模板要快点，一般2-3kb/min为宜。过慢的速度导致PCR反应的整体所需时间太长而导致超保真酶失活，过快的速度，不利于扩增长片段中可能存在的GC岛。

Q5：“长又亮”Neo超保真酶的保真性如何？

A5：其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的50倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。其实所有品牌超保真酶的保真性都差不多，不要被某些品牌说是Taq酶的200多，500多倍所迷惑，都是宣传噱头，因为大部实验，Taq酶的保真性就能满足。

Q6：“长又亮”Neo超保真酶有mix形式吗？

A6：其对应的mix货号是MF739。mix形式和单酶形式扩增能力差不多，只是在个别难扩的样本中，单酶可以添加DMSO或者甜菜碱来改善扩增。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。