尊敬的聚合美动物及多糖多酚双超mix粉丝：

非常感谢您对聚合美的支持和对新事物的拥抱，使用前请认真阅读《温馨提示》和《操作说明书》。

动物及多糖多酚双超mix （MF899）使用“温馨提示”：

• 动物及多糖多酚双超mix （MF899）含有三个组分：一个是裂解液叫“加强型扩增最佳伴侣”（MF859-plus），一个2xPCRmix叫“动物及多糖多酚双超mix”，还配带了一管ddH₂O，方便使用。

• 本产品免基因组DNA提取：“加强型扩增最佳伴侣”的作用是为了裂解细胞，释放出DNA当模板（请摸索最适合您实验的最佳伴侣和样本的比例关系：样本太多会超出最佳伴侣的处理上限，导致裂解不完全；样本太少会造成模板浓度过低，导致PCR失败）。因为裂解液在特殊的情况下需要20-50ul，而标准裂解是20ul处理体系，可能会有客户单独购买裂解液的需求，所以也可以单独购买。

• 在您收到本产品后，打开包装，将“加强型扩增最佳伴侣”取出放在室温，使用前看看是否有沉淀，一定要确保裂解液没有沉淀，否则按说明书在37度溶解澄清后使用。

• 样本处理量：菌液、菌体和液体样本，推荐是10ul处理体系。而植物和动物组织，推荐是20ul加入1-2平方毫米的样本，对于比较难处理的组织可以用50-100ul裂解液。务必采用适合的研磨方式来破碎组织，让细胞充分破裂释放DNA。

• 研磨小技巧：1）将蓝枪头用火灼烧融化成自制的“研磨杵”，在2mlPCR管中研磨幼嫩组织或者昆虫；

            2）成熟叶片或较大组织，加入50-100ul裂解液在1.5ml 离心管中用研磨杵旋转挤压破壁；

            3）种子或很厚样本（杨树叶片）需要先用液氮研磨，再取少数样本加入50-100ul裂解液；

（可以通过看裂解液的颜色来判断是否充分破碎）

• 沸水浴处理3-5分钟，如果实验室没有沸水浴，也可以用PCR仪98度处理3-5分钟。

• 12000rpm离心1-2分钟，取1-2ul做PCR模板，剩余的放在-20度保存一个月以上，以备后续再次检测。再次取出做模板时，务必12000rpm离心1-2分钟才能取上清1-2ul做PCR模板。

• 本产品主要针对多糖多酚的植物样本（比如棉花、烟草、番茄、杨树和一些海藻）和动物鼠尾、脚趾等样本，在沸水浴冷却到室温，然后12000rpm离心2分钟取上清。

• PCR程序设置：把PCR延伸速度降下来，平时是5-10秒/kb， 现在要变成30-60秒/kb， 因为在粗提物为模版的PCR中速度慢，好比类似在水里跑步和陆地跑步！

• PCR循环数：CTAB提取的DNA纯度高，浓度大，而本产品处理的DNA模板是粗提物，循环数要比以前用CTAB模板增加2-3个循环，效果会好很多

M5 动物及多糖多酚双超mix（无需提取基因组DNA）说明书

产品名称                  单位          货号

M5 动物及多糖多酚双超mix          1 ml         MF899-01

M5 动物及多糖多酚双超mix       10×1 ml        MF899-10

M5 动物及多糖多酚双超mix      100×1 ml        MF899-100

【储存条件】

动物及多糖多酚双超mix长期保存请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，可置于4˚C保存至少六个月。

直接扩增最佳伴侣，收到后置于常温保存，如果4˚C或-20˚C保存出现结晶，请将该试剂置于 37℃水浴中重新溶解后摇匀使用。

【产品简介】

本产品包含聚合美特制的加强型M5动物及双超mix直接扩增最佳伴侣，可以迅速裂解酵母、农杆菌、革兰氏阳性菌、放线菌等微生物的细胞壁，短暂煮沸后的液体可以直接作为PCR模板；同样可以用于动植物组织细胞样品的裂解，尤其是多糖多酚物种，是各种粗样品直接PCR的必备神器，可兼容普通Taq酶或高保真酶的下游PCR扩增。

本产品包含聚合美特制Best W5 HiPer High-Fidelity DNA Polymerase、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂，浓度为2×。Best W5 HiPer High-Fidelity DNA Polymerase比普通Taq酶扩增效率高、错配率低，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好、扩增速度快（30-60秒1kb）等优点。可最大限度地减少人为误差，可用于高特异性PCR反应及GC含量较高（>60%）具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR 产物是平末端，纯化后可直接用于TA 载体克隆(货号MF021或MF022)。 本产品有含红色染料，在PCR 反应完成后，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。红色染料可指示电泳进程，其迁移速度在1% TAE琼脂糖凝胶中与800 bp 双链DNA 片段相近。

【产品组份】

                                 储存温度    MF899-01    MF899-10    MF899-100

2x M5动物及多糖多酚双超mix      -20˚C         1 ml        10x1ml       100x1ml

M5加强型动物及多糖多酚最佳伴侣   常温         2 ml        10x2ml       100x2ml

Nuclease-free ddH₂O               常温         1 ml        10x1ml       100x1ml

【适用范围】

 1.基因检测：本产品不同批次之间误差很小，特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。

2.用于从复杂模板中如基因组等扩增PCR产物，如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析（SNP）等。

【所需试剂】

使用者仅需准备PCR反应的模板和引物等。

【样本处理方法】

• 裂解液处理组织样品时取样切勿太多；

B、裂解液处理后的用做PCR模板，加入的量不要超过PCR体系的1/10。

1、 菌液样品

将培养至对数生长期的菌液（酵母、革兰氏阳性菌、农杆菌、放线菌培养液等）以菌液和裂解液体积比1:2混合（5ul菌液：10ul最佳伴侣），直接沸水浴3-5分钟，短暂离心后取1-2µl作为后续PCR模板。

2、 平板上的菌落

用灭菌枪头挑取少量菌体，加入10 µl最佳伴侣，吹吸混匀，95 ˚C或沸水浴3-5 分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µl作为后续 PCR模板。

3、血液或其他液体样品（尿液、组织液或者各种体液）

以液体样本和裂解液体积比1:2混合（5ul样本：10ul最佳伴侣），95 ˚C或煮沸3-5分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µl作为后续PCR模板。

4、植物组织样品（幼嫩叶片，果实、种子、根组织等）

棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘等多糖多酚类样本，取2-3mm²样本加入30-50ul裂解液，将固体样品尽量研磨，煮沸5分钟，12000rpm离心2分钟，取1-2µl作为后续PCR模板。

5、动物组织样品（鼠尾、鼠耳等组织）

1-2mm²样本加入30-50ul裂解液，将固体样品尽量研磨，煮沸3-5分钟，12000rpm离心2分钟，取1-2µl作为后续PCR模板。

6、 土壤等环境组织样品

1-2mm²样本加入30-50ul裂解液，将固体样品尽量研磨，煮沸3-5分钟，12000rpm离心2分钟，取1-2µl作为后续PCR模板。

【PCR程序设置注意事项】

* 以粗提物为模板做PCR，因为模板量更少，循环数应比用CTAB提取DNA做模板PCR循环数多2-3个循环。

** 以粗提物为模板做PCR，杂质比较多类似在水中跑步，降低扩增速度有利于得到稳定结果，建议延伸速度60秒/1kb。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。