说明书：

MF660-M5 Quick Oligo Purification Kit 寡核苷酸纯化试剂盒.pdf

M5 Quick Oligo Purification Kit

寡核苷酸纯化试剂盒使用说明书

产品名称             单位          货号

M5 Quick Oligo Purification Kit     50T     MF660-01

【储存条件】

按照指定温度储存，12个月内不影响使用效果。储存事项：避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

【产品简介】

本试剂盒使用特殊的结合缓冲液能够高效纯化>15nt的单链或者双链DNA和RNA。特别适用于从标记反应（地高辛标记，同位素标记，生物素标记等）混合物中回收小片段标记探针，去除未反应的核苷酸、短oligos、染料、酶、盐离子等。典型的回收率高达80-90%，每个离心吸附柱每次可吸附的 DNA 量为 10µg 。使用本试剂盒回收的RNA或者DNA可适用于in Situ Hybridization、Northern blot、RNAi、Gel shift assay、Ligation、Sequencing、Microarray analysis等实验。

【产品特色】

离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

使用了优质结合液，不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

独特的配方保证了该试剂盒比一般试剂盒回收效率大大提高。并且适用于回收单链或者双链DNA和RNA。

快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

【产品组份】

【注意事项】

所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。

结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有核酸片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择胶回收试剂盒。

虽然本试剂盒推荐用于回收小片段或者寡聚核苷酸(>15nt)，但是也可以高效回收<10kb的较大片段DNA或者RNA。

回收RNA应该用本试剂盒带的RNase-free H₂O来洗脱。并保存在-70℃。DNA片段也可以根据需要用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），如果担心EDTA影响下游反应，使用时适当稀释。或者直接用（10mM Tris-HCl pH 8.0）洗脱。

【平衡液使用】

介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。

使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡缓冲液至柱子中。13,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

【操作步骤】

<第一次使用前请先在结合液OB瓶中加入指定量异丙醇! >

<第一次使用前请先在漂洗液RW中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!>

估计样品体积（最低体积50μl，不够可用灭菌水补足；回收RNA需要用RNase free H₂O补足），向其中加入 10 倍体积的结合液OB，温和地充分混匀（PCR 反应体系无需去除石蜡油或矿物油）。

回收>100bp片段时候，只需要加5倍体积结合液OB。

平衡液预处理吸附柱：

使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”

将上一步所得溶液加入吸附柱RA中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟，12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

     吸附柱最大容积为720µl，若溶液体积大于720µl，可分批加入。

加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

加入500μl漂洗液RW，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

将吸附柱EC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

取出吸附柱RA，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free H₂O，室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果需要较高浓度核酸，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要核酸浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于25μl，体积过小降低核酸洗脱效率，减少产量。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。