前四次PCR技术革命

PCR技术自上世纪80年代诞生以来，发展到今天，已经有30多个年头。30年间，有四次关键的技术突破，让PCR更加简单易用，灵敏度大幅提高，从静态结果到实时显示结果等，造就了今天PCR成为生物实验室的最基础实验。这四次关键的技术革命如下：

1） 1986年Taq酶的诞生，让最原始的PCR反应不用每次循环后再加入酶，让PCR反应得到简化，为后面PCR的广泛应用奠定基础。

2） 1988年PCR仪的诞生，标志着分子生物学进入自动化的新时代。PCR仪改变了原始PCR反应需要三个水浴锅来回置换的繁琐流程，从手动变成完全的自动化升降温过程，极大简化了PCR反应程序，使得PCR技术开始进入千家万户！

3） 1996年qPCR仪的诞生，标志着PCR从定性进入定量时代。qPCR是实时荧光定量PCR的简称，在普通PCR仪基础上加上发射和收集激光信号装置，通过检测每个循环中sybgreen染料或者探针的荧光变化，实时检测PCR反应的进程。qPCR技术自诞生就迅速用于体外诊断（IVD）中，现在是IVD最大的技术流派。

4） 2002年PCRmix的诞生，标志着PCR实验配置的极简化。Mix形式让客户更加方便配置PCR体系，稳定性和一致性更加提高，实验效率更加高效便捷。

总结前四次PCR技术革命，每一次都是效率、便捷度、简化度极大极高，像极了奥运精神“更高、更快、更强”！然而，在过去的20年里，PCR大厦的基本构架没有任何改变，我们只是进行了修修补补。比如，Taq酶基础上开发出了Taqhifi和各种超保真酶；mix的形式没有改变，只是把里头的酶改了，把PCR的速度提升了。

难道PCR技术真的到头了吗？

自配裂解液和市面上其他直扩试剂盒效果差强人意

其实不然，第五次PCR技术革命一直在默默的进行，只是我们没有觉察到。在图位克隆、分子鉴定、转基因鉴定等实验中，因为材料数量极大，购买DNA提取试剂盒又非常昂贵，而且提DNA费时费力，所以不少实验室都有自己独门暗器，免提取DNA直扩PCR：用叶片或者其他组织进行PCR。然而自配实验体系有一些缺陷，导致它没能够广泛应用，所以没有引起革命性的变化。

实验室师兄师姐发挥个人才智，设计出提取DNA的实验室独家秘籍（神秘的DNA裂解液），提高了工作效率缓解了工作强度。市面上有些公司也提供所谓的直扩PCR试剂盒（代表性的有进口B品牌、国产F品牌和T品牌），宣传通过简单处理就可以用来做PCR的模板。这类型的直扩试剂盒能用而且价格不菲，让绝大部分实验室依旧用传统的CTAB法提取DNA。

我们认真分析了实验室“神秘的DNA裂解液”和市面上部分厂家的直扩试剂盒，发现他们配方都比较相似：首先通过NaOH这个强碱裂解组织，然后通过Tris-HCl（或者用HCl）来中和，以达到后续PCR所要求的pH环境。所以大部分配方都需要加2个组分，有时甚至要加3个组分。这种配方有以下几个弊端：

1） 因为用了强碱强酸，移液的时候每个组分多点少点，会导致粗提物中的pH值波动很大，而Taq酶对pH又是超级敏感，只能在弱碱性环境下工作。粗提物PCR结果不稳定，时有时无飘忽不定，这也是很多同学宁愿选择传统的CTAB提取DNA，费时费力但是结果可靠稳定，就是这个原因！

2） 组分多，通常2-3个，加样移液并没有省下多少时间，而且不少公司都需要加热处理10-30分钟，本来直扩就想省时省事，丝毫没有什么改善。

3） 操作需要格外小心，因为用到了强碱强酸，具有强腐蚀性，稍微操作不当会灼烧到自己。

4） 裂解液不能通用，需要用不同配方来处理动物或者植物样本。

聚合美超光速mix，引爆第五次PCR技术革命

为了解决上述问题，聚合美推出自主研发的超光速mix，含有独家的裂解液（最佳扩增伴侣）和适合粗提物扩增的mix（见下图），让您转基因鉴定、图位克隆和常规PCR不再困难，彻底摆脱提DNA的苦恼。

和市面上其他公司直扩PCR产品相比，超光速mix具有如下特色：

1） 单组分裂解液，操作简单又避免样本交叉污染，只需5-10分钟。

2） 不含强酸强碱组分，安全可靠不用担心被灼烧，而且后续PCR稳定可靠！

3） 裂解液亲切称它为最佳扩增伴侣，能够处理各种样本。无论微生物（酵母、农杆菌，霉菌、卵菌、放线菌等），植物（拟南芥，水稻，玉米，小麦，大豆，杨树，番茄、木薯等），还是动物（昆虫，斑马鱼，鼠尾等），也可以处理血液，培养细胞等等，具有广泛的适用性。

超光速mix操作极为简单，只需采样，研磨（可选），加热三步就完成了样本处理：