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聚合美血液RNA常温保存/运输/提取试剂盒产品选择技巧

1.     客户需要收集保存零散送来的新鲜抗凝血样,将来统一提取,并不打算4度或者常温的较长时间运输。

首选MF156超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒,在临床上采血时,可以先把试剂盒中的裂解液RLS( 也就是液体样品RNA提取试剂货号:MF034-plus)分装750 μl1.5ml的离心管中。血液样本可以先抗凝处理(EDTA抗凝或者其他抗凝方式都可),然后取250 μl全血样品加入到750μlMF034-plus中,用移液枪反复抽打并振荡混匀,在室温裂解5min-10min,直至血细胞充分发生裂解。然后可把此裂解液直接保存在-20下可达1-2个月,-80可达半年(推荐温度越低越好)。后续可以按照MF156试剂盒后续操作步骤直接提取RNA运输过程可以冰袋运输4 1天,干冰运输-20 一周。 

注意:如果客户需要保存处理提取RNA的血液体积超过0.25ml,可以用MF034-plus来做

血液.jpg

2.客户需要收集保存新鲜抗凝血样,并且需要常温或者4度的不超过3-5天的运输(当然如果运输能用干冰运输肯定效果更好)。运输到目地地后负80度冰箱至少可以保存半年。

两种解决方案:一种是RNAlater保存和配套提取试剂盒的方案;一种是PAXgene采血管和配套提取试剂盒的方案。而有明确文献证据证明RNAlater方案RNA产量至少是PAXgene方案的一倍,RNA完整性也要更好!所以,首先推荐RNAlater方案。

 

A: RNAlaterMF150)方案:(这个方案不如MF156

运输保存:首先按照正常的采血流程获得抗凝新鲜血,充分颠倒混匀后,吸取300-500 μl抗凝全血加入到1.3 ml RNAlater中颠倒充分混匀,就可以开始运输了。一般建议常温或者4度运输不超过3天,更长时间运输会有RNA产量逐渐降低,如果时间更长,建议使用干冰运输。到达目的地后,放负80度,至少保存半年。

提取RNA保存在RNAlater中的血样因为样品中含有大量的硫酸铵(RNAlater的主要成分),所以普通试剂盒无法提取,或者提取的产量很低,纯度也差,必须用特制的试剂盒提取,需选择本公司MF656提取。

 

B: PAXgene采血管(BD 762165 PAXgene Blood RNA Tube)方案:(这个方案不如MF150

运输保存:按照PAXgene Blood RNA tube 静脉真空采血管(全血RNA管)说明书采集血液。该系统可以收集全血、稳定核酸、纯化RNA该采血管中添加了特殊的试剂,可以快速地保护细胞内的RNA被降解,在1825可以保存3天,28可以保存5天。到达目的地后,放负80度,至少保存4年。

提取RNA保存在PAXgene采血管的中血样提取,必须用特制的试剂盒提取,需选择本公司MF657,该试剂盒为本公司国内首家和独家产品,按照MF657试剂盒的说明书进行提取。

 

聚合美全血样品RNA提取产品选择指南:

-       如果是新鲜血样品,首先推荐MF156 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒和MF155 超纯全血总RNA快速提取试剂盒;如果你想不用苯酚/氯仿的提取,就推荐MF612

 

-       如果是冰冻血,只有选择MF156RNA提取试剂盒;需要处理,运输,保存血液样品后再提取也是推荐MF156超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒。

 

A: 未保护直接冻存血液(血液RNA保存的时候,一定要先处理了才保存,直接把抗凝血液冻到负80冰箱,RNA肯定会有降解,至少部分降解。提取冻存的血液RNA的时候,只有选择MF156超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒,这款试剂盒可以直接裂解全血(白细胞和红细胞混合的全血),而不需要和普通试剂盒一样,先裂解红细胞得到白细胞再往下面进行。因为血液细胞冰冻后已经受损破裂,RNA酶释放出来了,如果你先裂解液红细胞再裂解白细胞,就会在过程中,降解RNA,此外,RNA已经释放了,裂解红细胞过程中去上清的时候也会丢失一部分RNA。所以这个时候,必须使用可以直接裂解全血的裂解液,趁RNA酶还没有完全降解RNA的时候,迅速和全血混匀,抑制住RNA酶,然后往下面提取。


B:
新鲜的血液

(1)     也可以用MF156 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒。

(2)     可以选择MF155超纯全血总RNA快速提取试剂盒,这个原理就是先红细胞裂解液裂解红细胞得到白细胞,然后Trizol裂解白细胞,最后离心柱子漂洗。

(3)     MF612全血RNA快速提取,这款和Qiagenqiaamp blood RNA KIT一样,优点是不用苯酚,氯仿(trizol)毒性物质。缺点是残留DNA较多,如果下游需要做荧光定量PCR,请推荐和MF611 DNaseI柱上消化试剂盒一起使用。该款产品加DNA酶柱上消化等于天根的DP433

(4)     如果经费特别紧张,也可以选择MF034-plus TRIpure LS ReagentLS就是liquid sample的意思,液体样品RNA提取试剂,就是专门提取液体样品的TRIzol版本。这个缺点就是不用离心柱子纯度差一点(当然一般不影响试验结果),繁琐一点,对操作技术的要求高一点,样品量太小也不适合。

 

注意:全血RNA提取容易残留较多DNA,因此如果下游是做荧光定量PCR,一般建议同时购买MF611 DNase I柱上消化试剂盒配套使用。