说起提基因组DNA做模板,上千份样本让人心烦意乱,每到采样季,多少研究生都不愿想起那些年洗过的研钵和无数的EP管。菌落PCR,各种处理后,酵母、农杆菌等还没裂开,而做实验的您估计脑袋快要炸开了!多想有一款靠谱的直接PCR产品来拯救实验,拉您跳出基因组DNA提取泥潭!聚合美超光速Mix及PCR扩增伴侣,免提基因组DNA,直接PCR,带您进入伟大的PCR新时代!
从样本到PCR出结果,1小时搞定!
实验前看温馨提示,实验事半功倍哦!
1、超光速mix(MF848)含有三个组分:一个是裂解液叫“扩增最佳伴侣”(MF859),一个2xPCRmix叫“超光速mix”,还配带了一管ddH2O,方便使用。
2、因为裂解液(MF859)在特殊的情况下需要20-50ul,而标准裂解是20ul处理体系,可能会有客户单独购买裂解液的需求,所以MF859也可以单独购买。
3、在您收到本产品后,打开包装,将“扩增最佳伴侣”取出放在室温,使用前看看是否有沉淀,一定要确保裂解液没有沉淀,否则按说明书在37度溶解澄清后使用。
4、本产品免基因组DNA提取:“扩增最佳伴侣”的作用是为了裂解细胞,释放出DNA当模板(请摸索最适合您实验的最佳伴侣和样本的比例关系:样本太多会超出最佳伴侣的处理上限,导致裂解不完全;样本太少会造成模板浓度过低,导致PCR失败)
5、样本处理量:菌液、菌体和液体样本,推荐是10ul处理体系。而植物和动物组织,推荐是20ul加入1-2平方毫米的样本,对于比较难处理的组织可以用50-100ul裂解液。务必采用适合的研磨方式来破碎组织,让细胞充分破裂释放DNA。
6、 研磨小技巧:
1)将黄枪头用火灼烧融化成自制的“研磨杵”,在0.2mlPCR管中研磨幼嫩组织或者昆虫;
2)成熟叶片或较大组织,加入50-100ul裂解液在1.5ml 离心管中用研磨杵旋转挤压破壁;
3)种子或很厚样本(杨树叶片)需要先用液氮研磨,再取少数样本加入50-100ul裂解液;
(看裂解液的颜色来判断是否充分破碎)
7、沸水浴处理3-5分钟,如果实验室没有沸水浴,也可以用PCR仪98度处理3-5分钟。
8、取1-2ul做PCR模板,剩余的可以放在-20度保存一个月以上,以备后续再次检测。
9、因为不同物种的基因组GC含量不同,我们设置了几种2xPCRmix来对应。对于常见物种推荐MF848;而对于松松、杨树、棉花、黄瓜等基因组GC含量比较低,推荐MF848-AT;某些海洋生物GC含量非常高,推荐MF848-GC。MF848、MF848-AT、MF848-GC三者唯一的区别就是2xPCRmix不同,其他组分和操作都相同。
最佳搭档,直接PCR不再是问题
1、大量转基因植物的阳性苗鉴定
•转基因拟南芥,水稻,玉米,小麦,大豆,谷子一次转基因要做几十甚至上百份材料。
•对100多份苗提取DNA,工作量非常大。
•有时还容易出现交叉污染
叶片样本:剪很小叶片加入10 µl 裂解液混匀,沸水浴3-5 分钟,离心取1-2µl作为PCR模板 。
实验示例一:大豆叶片及豆粉直接PCR鉴定
超光速mix对豆粉,叶片样本的PCR结果和CTAB法提取DNA的PCR结果没有差别。
2.作物新基因位点的图位克隆
•水稻,玉米,小麦,新基因位点的鉴定,一般通过图位克隆方法鉴定。
•图位克隆通常涉及1000多份甚至更多植株提取DNA,工作量巨大!
•如何将您从枯燥繁杂的提取实验中解放出来,是我们的目标!
叶片样本:剪很小叶片加入10 µl 裂解液混匀,沸水浴3-5 分钟,离心取1-2µl作为PCR模板 。
实验示例二:水稻抗稻瘟病位点筛选
以前做法:提取100份基因组DNA ,用时一天,身心俱疲,怀疑人生!
使用超光速Mix:1小时轻松处理100份样品,更早得到实验结果!
3.酵母/农杆菌/革兰氏阳性菌/放线菌的菌落PCR失败?
•酵母/农杆菌/革兰氏阳性菌/放线菌等微生物有非常厚的细胞壁。
•常规通过95度预处理5-10分钟,没法让细胞破裂 。
•无法释放DNA做模板,导致PCR失败。
如何解决:MF859简单处理后做模版。
菌液样本:菌液和裂解液体积比1:2混合,沸水浴3-5分钟,离心取1-2µl作为PCR模板。
菌落样本:挑少量菌加入10 µl 裂解液混匀,沸水浴3-5 分钟,离心取1-2µl作为 PCR模板。
实验示例三:酵母菌落PCR
以前做法:95℃预变性5min,没结果!10min,还是不行!!!怎么办???
使用超光速Mix:使用PCR分子伴侣处理,一次成功!
4.鼠尾检测PCR结果不稳定或者失败
•常见鼠尾直扩裂解液都是先用强碱NaOH裂解鼠尾,然后用HCl中和。
•如果稍微加得多点少点,枪头沾点,都会导致pH急剧变化。
•这样的粗提物,对后续的PCR有极大的影响,使得结果非常不稳定。
如何解决:MF859 简单处理后做模版 。
鼠尾样本:剪很小鼠尾加入10 µl 裂解液混匀,沸水浴3-5 分钟,离心取1-2µl作为PCR模板 。
实验示例四:水稻稻飞虱幼虫直扩
客户反馈
聚合美超光速Mix一经投入市场,不用提基因组DNA直接PCR的理念受到广大客户的欢迎,大家纷纷索要试用装,用于自己的研究。这些天也收到了很多客户的称赞和感谢!
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福建郑老师水稻叶片结果
吉林农科院玉米样本结果
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时间短:大量基因组DNA的提取事情,省了!
经费省:基因组DNA提取,不用买了!
不再苦:扣ep管到手酸,数天连夜的研磨样本,以后统统不会有了!
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