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第五次PCR技术革命,您参与了吗?

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前四次PCR技术革命

 

PCR技术自上世纪80年代诞生以来,发展到今天,已经有30多个年头。30年间,有四次关键的技术突破,让PCR更加简单易用,灵敏度大幅提高,从静态结果到实时显示结果等,造就了今天PCR成为生物实验室的最基础实验。这四次关键的技术革命如下:

 

1) 1986年Taq酶的诞生,让最原始的PCR反应不用每次循环后再加入酶,让PCR反应得到简化,为后面PCR的广泛应用奠定基础。

 

2) 1988年PCR仪的诞生,标志着分子生物学进入自动化的新时代。PCR仪改变了原始PCR反应需要三个水浴锅来回置换的繁琐流程,从手动变成完全的自动化升降温过程,极大简化了PCR反应程序,使得PCR技术开始进入千家万户!

 

3) 1996年qPCR仪的诞生,标志着PCR从定性进入定量时代。qPCR是实时荧光定量PCR的简称,在普通PCR仪基础上加上发射和收集激光信号装置,通过检测每个循环中sybgreen染料或者探针的荧光变化,实时检测PCR反应的进程。qPCR技术自诞生就迅速用于体外诊断(IVD)中,现在是IVD最大的技术流派。

 

4) 2002年PCRmix的诞生,标志着PCR实验配置的极简化。Mix形式让客户更加方便配置PCR体系,稳定性和一致性更加提高,实验效率更加高效便捷。

 

总结前四次PCR技术革命,每一次都是效率、便捷度、简化度极大极高,像极了奥运精神“更高、更快、更强”!然而,在过去的20年里,PCR大厦的基本构架没有任何改变,我们只是进行了修修补补。比如,Taq酶基础上开发出了Taqhifi和各种超保真酶;mix的形式没有改变,只是把里头的酶改了,把PCR的速度提升了。

 

难道PCR技术真的到头了吗?

 

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自配裂解液和市面上其他直扩试剂盒效果差强人意

 

其实不然,第五次PCR技术革命一直在默默的进行,只是我们没有觉察到。在图位克隆、分子鉴定、转基因鉴定等实验中,因为材料数量极大,购买DNA提取试剂盒又非常昂贵,而且提DNA费时费力,所以不少实验室都有自己独门暗器,免提取DNA直扩PCR:用叶片或者其他组织进行PCR。然而自配实验体系有一些缺陷,导致它没能够广泛应用,所以没有引起革命性的变化。

 

实验室师兄师姐发挥个人才智,设计出提取DNA的实验室独家秘籍(神秘的DNA裂解液),提高了工作效率缓解了工作强度。市面上有些公司也提供所谓的直扩PCR试剂盒(代表性的有进口B品牌、国产F品牌和T品牌),宣传通过简单处理就可以用来做PCR的模板。这类型的直扩试剂盒能用而且价格不菲,让绝大部分实验室依旧用传统的CTAB法提取DNA。

 

我们认真分析了实验室“神秘的DNA裂解液”和市面上部分厂家的直扩试剂盒,发现他们配方都比较相似:首先通过NaOH这个强碱裂解组织,然后通过Tris-HCl(或者用HCl)来中和,以达到后续PCR所要求的pH环境。所以大部分配方都需要加2个组分,有时甚至要加3个组分。这种配方有以下几个弊端:

 

1) 因为用了强碱强酸,移液的时候每个组分多点少点,会导致粗提物中的pH值波动很大,而Taq酶对pH又是超级敏感,只能在弱碱性环境下工作。粗提物PCR结果不稳定,时有时无飘忽不定,这也是很多同学宁愿选择传统的CTAB提取DNA,费时费力但是结果可靠稳定,就是这个原因!

2) 组分多,通常2-3个,加样移液并没有省下多少时间,而且不少公司都需要加热处理10-30分钟,本来直扩就想省时省事,丝毫没有什么改善。

3) 操作需要格外小心,因为用到了强碱强酸,具有强腐蚀性,稍微操作不当会灼烧到自己。

4) 裂解液不能通用,需要用不同配方来处理动物或者植物样本。

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聚合美超光速mix,引爆第五次PCR技术革命

 

为了解决上述问题,聚合美推出自主研发的超光速mix,含有独家的裂解液(最佳扩增伴侣)和适合粗提物扩增的mix(见下图),让您转基因鉴定、图位克隆和常规PCR不再困难,彻底摆脱提DNA的苦恼。

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和市面上其他公司直扩PCR产品相比,超光速mix具有如下特色:

1) 单组分裂解液,操作简单又避免样本交叉污染,只需5-10分钟。

2) 不含强酸强碱组分,安全可靠不用担心被灼烧,而且后续PCR稳定可靠!

3) 裂解液亲切称它为最佳扩增伴侣,能够处理各种样本。无论微生物(酵母、农杆菌,霉菌、卵菌、放线菌等),植物(拟南芥,水稻,玉米,小麦,大豆,杨树,番茄、木薯等),还是动物(昆虫,斑马鱼,鼠尾等),也可以处理血液,培养细胞等等,具有广泛的适用性。

超光速mix操作极为简单,只需采样,研磨(可选),加热三步就完成了样本处理

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超光速mix客户好评如云

 

超光速mix一经推出,立刻得到市场热烈反响。全国各地学子纷纷索取试用装,试用后效果非常满意,尤其是做水稻、玉米育种研究的小伙伴。“群众的智慧是无限的”,给我们反馈回来非常多好的建议,尤其是如何处理样本;“群众的眼光是雪亮的”,越来越的同学口口相传,让超光速mix真正做到了“从群众中来,到群众中去”!以下是各地学子反馈的经典案例:

 

案例1、福建农林大学郑老师比较了自制裂解液和超光速mix的裂解液(最佳扩增伴侣),发现超光速mix裂解液效果更强更稳定,和CTAB提取的DNA做模板扩增没有差别。

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案例2、华中农业大学李老师用超光速mix做水稻抗性位点分子鉴定,结果清晰稳定。

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案例3、吉林农科院陈老师用超光速mix做玉米转基因鉴定,结果清晰稳定。

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案例4、中国农科院作物所郭老师比较了超光速mix和CTAB提取的DNA做模板扩增,发现没有差别,而且发现不仅可以处理叶片,也能处理豆粉(种子)。

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案例5、江苏南通三黍公司汪老师比较了超光速mix扩增各种薯类的效果,不仅能直扩木薯、番茄、甘薯,经过优化条件后也能扩增烟草和马铃薯等多糖多酚物种的叶片。 

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案例6、华南农大农学院周老师课题组“美亲”(微信昵称)老师,用超光速mix鉴定T0代转基因本氏烟草,获得非常满意结果。

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案例7、吉林农科院玉米研究所孟老师,用超光速mix鉴定转基因玉米,并没有用普通的琼脂糖电泳分析结果,而是通过毛细管电泳,获得非常满意结果。说明超光速mix完全适合毛细管电泳分析。 

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因新冠疫情影响,各高校、研究所延期开学,选择聚合美超光速Mix,把耽误的时间抢回来!

 

时间短:大量基因组DNA的提取时间省了!

经费省:基因组DNA提取试剂盒不用买了!

不再苦:开盖关盖各种移液到手酸不会有了!

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超光速mix使用技巧和温馨提示

 

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研磨小技巧(一)

如果实验室已有植物磨样方案,使用超光速mix的技巧:

1)沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

2)然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

3)后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1ul上清做PCR。

 

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研磨小技巧(二)

如果实验室以前没有植物或者动物磨样经验,使用超光速mix的技巧:

1)将蓝枪头用火灼烧融化成自制的“研磨杵”,在0.2mlPCR管中研磨幼嫩组织或者昆虫;

2)成熟叶片或较大组织,加入50-100ul裂解液在1.5ml 离心管中用研磨杵旋转挤压破壁;   

3)种子或很厚样本(杨树叶片)需要先用液氮研磨,再取少数样本加入50-100ul裂解液;

(可以通过看裂解液的颜色来判断是否充分破碎) 

 

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PCR程序设置小技巧

1)PCR延伸速度设置为60/kb,粗提物为模板速度慢,类似在水里跑步和陆地跑步!

2)适当增加循环数2-3个循环。基因组越小扩增条带就越亮,比以前用CTAB提取DNA当模板时增加2-3个循环,效果会好很多。

 

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多糖多酚物种样本处理小技巧

 

对于多糖多酚的植物样本(比如棉花、烟草、番茄、杨树和一些海藻)和动物鼠尾等胶原蛋白含量丰富的样本,在沸水浴处理后冷却到室温,加入等体积的氯仿振荡处理,然后12000rpm离心2分钟取上清,PCR效果会有很大改善。同时,我们推荐用MF899替代MF848

 

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对样本进行二次PCR时的处理小技巧

第一次鉴定后剩余的样本放在-20度保存,再次检测取出做模板时,务必12000rpm离心1-2分钟才能取上清1-2ul做PCR模板。

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超光速mix 7折促销

 

超光速Mix新品上架,欢迎小伙伴们申请试用装体验新一代的PCR技术!从即日起至2020年9月30日,聚合美超光速Mix系列产品七折促销,大家可以通过下方聚合美官方微信及电话或当地代理商订购相关产品!

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