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最经典“常见问题解答(FAQ)

最经典“常见问题解答(FAQ)”:

1、lip2000和lip3000的区别在哪?

  • Lip2000:单组份,通用性强,质粒DNA和siRNA 可以共转染,但用量

比例大。优点的是经济实惠,缺点是对难转染的细胞效果一般

  • Lip3000:lip2000的升级款,加了DNA孵育试剂,双组分,在难转染

的细胞面前也有相对较高的效率,毒性也比2000更低,用量也更少。 缺

点是主要针对DNA质粒转染,在共转染和RNA领域效果一般

 

2、转染过程中需不需要换液?(也就是能否“偷懒”)

  • 转染过程中涉及两个阶段的换液操作
  • 一是在转染前需要提前把营养液换成无血清培养基(且无抗生素),其

目的是更好的转染效果,避免血清及抗生素的干扰

  • 二是在转染后 6小时需要把转染的工作液换掉,目的是防止转染试剂毒性

长期影响。这次换液,有条件的话肯定是换液效果会更好,达到最佳的

转染效果和降低对细胞的毒性

  • 具体换不换液,我们建议是分细胞:常规细胞好转染的可以不换液,如

果相对难转染的细胞,换液是必须的,以便提升转染效率

 

3、脂质体加在PBS、培养基或其他液体里面?

  • 转染过程中血清会影响脂质体和核酸复合物的形成!不能有血清,

此时细胞是最脆弱最需要营养

  • 最好是optimem减血清培养基(MF988),它是血清替代营养液,

可以保证无血清的情况下,又能保证转染过程的营养供给

  • 常规培养基可以
  • 但PBS不建议,PBS是没有营养的

 

4、质粒和脂质体用量比例怎么换算?

  • 初次摸索条件,推荐:DNA和转染试剂比例为1:2-1:3
  • 细胞实验原则上没有固定比例,和细胞类别和细胞本身状态影响很大
  • 建议客户每次做实验前都参照说明书用量都做个梯度,以实际最佳效率

逐渐优化,尽量不要用按部就班的比例和用量的

 

5、慢病毒转染用lip2000可以吗?

  • 转染是复杂的过程,与转染试剂 、病毒大小和类别、还有细胞的类别等

关系密切,不能说都可以,只能说像腺病毒 293 等常规的是可以的

  • 如果之前用过进口的lip2000,那我们的也可以,因为作用原理是一样的,

可以直接替换

  • 或者用过其他品牌的脂质体的,成功转染,那我们一般也没有问题
  • 但如果之前没做过这方面相关实验,那只能说让客户试下,摸索条件

 

6、lip2000同时转染DNA质粒和miRNA,可以吗?

  • Lip2000可同时转DNA和siRNA,两者加起来的量和说明书量一

样即可(很多品牌不支持共转染,聚合美的可以!)

  • Lip2000同时转DNA和miRNA 效果的话一般
  • 如果质粒多的情况下,可以分开转染
  • 如果质粒量少的情况下,可以把他们混合共转染,总量不超过实

验用量就可以

7、lip3000对难转细胞,如何优化?

  • 转染试剂和质粒用量建议提前做个梯度预实验,原则上细胞状态

允许的情况下,转染试剂用量越高效率也会随着提高

  • 选细胞生长状态最好,密度最佳(90-95%)的时候转染
  • 期间最好不要加血清和抗生素
  • 转染时间控制在6小时左右
  • 质粒提前纯化好,强烈推荐聚合美无内毒素质粒大提(MF985)

8、lipRNAmax 转 siRNA没有作用,为何?如何优化?

RNA转染不成功的因素比较多,从以下几个方面找原因并优化;

  • 首先蛋白水平检测要在48-72小时内,多测几个时间点,时间太短蛋

白水平可能会出现检测不准的情况

  • RNA的有效性也要排查下,比如转染过程中RNA降解,RNA浓度不

够,引物设计位置尽量不要在同侧,干扰靶点等

  • 以上都没问题,再通过优化转染试剂用量。最好做先做预实验,事

先用荧光转染先验证下能否成功转染,同时优化下最佳用量比例。

同时转染过程中尽量不要加抗生素和血清