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M5 HiPer Yeast Protein Extraction Kit 酵母蛋白抽提试剂盒
货号 规格 销售价
MF187-02 50T 998.00
  • M5 Yeast Protein Extraction Kit

    使用说明书

     

     

    产品名称                     单位        货号

    M5 Yeast Protein Extraction Kit     50T      MF187-02

     

     

     

    STORAGE

     

    常温下运输,收到后,将等渗液和低渗液在4℃保存,蜗牛酶和PMSF在-20℃的冰箱中保存,保质期两年。

     

     

    产品简介

     

    酵母蛋白提取试剂盒采用EDTA,山梨醇和蜗牛酶,蛋白酶抑制剂,蜗牛酶在合适的等渗体系中消化酵母的细胞壁,在用等渗液冲洗后,用含有蛋白酶抑制剂和温和去污剂的低渗缓冲液进行反复冻溶,促进细胞破裂,从而释放蛋白质,可以应用酵母蛋白和重组胞内蛋白的活性分析,western blot、SDS-PAGE、2D和免疫共沉淀等蛋白质电泳以及免疫学实验,每次可以处理50mg的湿重酵母,可以使用50次。

    如果酵母蛋白提取后续实验为SDS-PAGE等变性蛋白电泳及免疫学实验,亦可通过裂解液(组分II)处理后加入SDS-PAGE上样缓冲液直接制备蛋白样品。

     

     

    产品组份 I

     
       

     

     

            50T

    等渗液                   75 mL

    低渗液                   25 mL

    蜗牛酶                  0.25 mL

    PMSF                  0.25 mL

     

     

    产品组份 II

     
       

     

     

               50T

    裂解液                      10 mL

    中和液                     0.4 mL

    5xSDS 上样缓冲液           1 mL

     

     

     

    注意事项

     

    按照每50 mg湿重加500μL的等渗液和5μL的蜗牛酶,菌体的量不能够过多,否则会使的菌体裂解不充分。

    裂解后的酵母菌蛋白液,应在-20℃的冰箱中保存。

    在跑电泳时,由于蜗牛酶已经被冲洗,所以可能产生与蜗牛酶相关的几个条带,一般不会产生。

    溶液使用后,请旋紧瓶盖,防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。

     

    操作步骤 I

     

    将酵母在28-30℃的环境中培养到OD600=1.0左右。8000 rpm(5000g) 离心1 min,收集菌体并称量菌体的湿重。

     

    以每50mg湿重加500μL等渗液,5 μL蜗牛酶和1 μL的巯基乙醇,枪头吹吸或者涡旋震荡,将菌体悬浮。

     

    30℃水浴60 min,5000 rpm(2500g) 离心1min,去上清,收集沉淀。

     

    用500μL等渗液重悬,再5000 rpm(2500g) 离心1 min,去上清,收集沉淀,重复洗涤一次。

     

    加人500μL 低渗液(使用前,在500μL低渗液中加5 μL PMSF)重悬,再放入-20℃冰箱中冷冻30 min,室温溶解。再放入-20℃冰箱中冷冻30 min,室温溶解。

     

    裂解后的溶液12000 rpm (12830g) 离心5 min后,取上清可以用于实验。

     

     

     

    操作步骤 II

     

    将酵母在28-30℃的环境中培养到OD600=1.0左右, 取2-5 ml 培养物,8000 rpm(5000g) 离心1 min,收集菌体, 尽量将培养基上清去除干净。

     

    加入200 μL裂解液和4 μL的巯基乙醇,枪头轻轻吹吸将菌体悬浮。

     

    放入金属浴,96 加热 10 min.

     

    加入5 μL中和液,震荡混匀。

     

    12000 rpm 离心5 min后取20 μL上清加入5 μL 5xSDS 上样缓冲液混匀,即可用于蛋白电泳 (可根据情况梯度上样确定最佳上样体积, 如 3 μL, 6 μL, 9 μL )

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。