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M5 HiPer Herbal Medicine Plant RNeasy Mini Kit “繁可简”中草药植物RNA提取试剂盒
货号 规格 销售价
MF996-T 20T 1998.00
MF996-01 50T 3598.00
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    尊敬的聚合美粉丝:

     

     

    非常感谢您对聚合美的支持和对新事物的拥抱,

     

     

    使用本产品前请认真阅读《温馨提示》和《操作说明书》。

     

     

     

     

    “繁可简”系列多糖多酚植物RNA提取试剂盒使用“温馨提示”

     

     

     

    • “繁可简”系列产品针对的是多糖多酚植物RNA提取。普通植物RNA提取建议用聚合美MF035,MF037或者MF610来做,因为杀鸡焉用牛刀,上述3个货号更便宜,节省实验室经费。

     

     

    • “繁可简”系列产品最大特点不需要苯酚,氯仿等有毒试剂,也不需要乙醇沉淀;可在25-30分钟内完成单个样本提取。不同样本RNA含量差异非常大,通常100mg样本能提到05-5ug甚至更高的高质量RNA。

     

     

    • 常见多糖多酚植物包括:中草药如石斛/丹参/雪莲/人参;植物果实如葡萄/蓝莓/草莓/香蕉/苹果/梨/西瓜果肉/紫菜/仙人掌/芦荟;复杂花卉和园艺植物如月季/玫瑰/梅/牡丹花/冬青/松针/沙棘/胡杨等。以及用其他品牌提不出来的样本,都可以认为是多糖多酚样本。

     

     

    • 处理的样本尽量新鲜采集,然后马上提取。如果需要长期保存样本,请用聚合美的“完璧纯”样本保存液(MF150,切勿用trizol或者-80度直接保存,以防RNA降解。具体原因可以参考聚合美公众号文章。

     

     

    • 提完RNA,不能只测OD值,必须要跑RNA电泳(简易RNA电泳条件同DNA电泳,只需要把电泳槽、梳子和胶板洗干净,用新的琼脂糖和电泳缓冲液配胶,跑胶:胶浓度1%;1×TAE电泳缓冲液;120V,15 min)。可以通过28S,18S,5SrRNA的条带来判断RNA的质量。

     

     

    • 只能通过电泳结果来判断RNA的质量。RNA的质量包括:完整性(28S:18S=2:1)、纯度(有没有蛋白污染,有没有gDNA污染,其他杂质污染等)和浓度。

     

     

    • 只有在RNA没有降解,也没有污染的情况下,才能用OD值算RNA的浓度。要知道,如果RNA降解了,OD变大,有蛋白污染OD也会变大,如果有gDNA污染OD也变大。

     

     

    • 因为多糖多酚植物样本组分非常复杂,如果提取出来的RNA电泳结果图显示有gDNA污染,也是非常正常的,不必惊慌。后续反转录可以用带gDNA清除的试剂盒(聚合美MF949来处理,不影响qPCR结果。

     

     

    • 聚合美在多糖多酚植物RNA提取领域的技术是顶尖的,我们敢于和任何品牌同场竞技,接受现场PK。结果以电泳图为准,不能靠OD值。因为我们知道某些品牌存在人为操控,使得OD值比我们高很多,但是电泳条带不如我们,后续反转录和qPCR实验中他们的Ct值更大。

     

     

     

     

     

     

    M5 HiPer Herbal Medicine Plant RNeasy Mini Kit

    “繁可简”中草药植物RNA提取试剂盒

    使用说明书

     

     

    产品名称                  单位       货号

    M5 HiPer Herbal Medicine Plant RNeasy Mini Kit    50T    MF996-01

     

     

     

    储存条件】  常温保存,组分若有沉淀,在37˚C水浴加热恢复澄清后使用。

     

     

     

    产品简介

     

    “繁可简”中草药植物RNA提取试剂盒,不需苯酚、氯仿,含有独家基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留,得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。本产品具有强大的提取能力,针对中草药植物RNA提取,把试剂盒组分进行了专门的优化,很多其他品牌提取失败的样本,我们能轻松提取出来。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶, 离心沉淀去除多糖多酚和次级代谢产物,然后裂解混合物用乙醇调节RNA结合吸附到基因组DNA清除柱,然后RNA被选择性洗脱滤过, 吸附在基因组DNA清除柱上的残留DNA无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清除掉DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H2O将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

     

     

     

    产品特色

     

    1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。

     

    1. 不需要苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀,快速方便,一般可在25-30分钟内完成。

     

    1. 3.基因组DNA清除柱技术有效清除gDNA残留,得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。

     

    1. 4. 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达0-2.2。

     

     

     

    产品组份

     

              50T                     注意事项

    裂解液CLB                                 50ml        

    裂解液RLT Plus                             25ml        

    去蛋白液RW1                               40ml       

    漂洗液RW                                  10ml       初次使用前请按瓶标说明加入指定量的无水乙醇

    RNase-Free H2O                            10ml        

    基因组DNA清除套管                        50套       

    RNase-Free吸附套管(RA)                    50套       

     

     

     

     

     

     

    注意事项

     

    1. 所有的离心步骤均在室温完成(4˚C离心也可以),使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。

     

    1. 需要自备β-巯基乙醇、乙醇(尽量新开封或者RNA专用),研钵。

     

    1. 裂解液CLB、RLTplus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

     

    1. 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力,否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量,将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。

     

    1. 预防RNase 污染,应注意以下几方面:

     

    1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。

    2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。

    3) RNA 在裂解液RLT 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150˚C烘烤4 小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。

    4) 配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%( v/v),37˚C放置过夜,高压灭菌。)

     

    1. 关于DNA 的微量残留:

     

    一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,本产品采取了独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜,在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留(一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:

    1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。

    2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。

     

     

     

    操作步骤

     

     

    <实验前请先阅读注意事项,第一次使用前请先在漂洗液RW中加入指定量的无水乙醇!>

     

     

     

    实验前准备:取1ml裂解液 CLB至离心管内 (如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解),在裂解液CLB中加入5% β-巯基乙醇(1ml CLB50μl β-巯基乙醇)。颠倒混匀后65°C水浴中预热。多个样品按照比例放大准备

     

     

     

    1. 直接研磨法(实验室无液氮情况下或者柔软易研磨植物样品推荐此法):

     

    1. 新鲜植物组织或者冰冻保存样品称重后取100-200mg(水分少的样品可加100-150mg,水分多的样品可多加一些)迅速剪成小块放入研钵,加入 1ml CLB(已加有β-巯基乙醇)室温下充分研磨成匀浆,注意应该迅速研磨让组织和裂解液CLB立刻充分接触以抑制RNA酶活性。

     

    <β-巯基乙醇是裂解液CLB的关键成分,必要的时候可以提高终浓度到10-20%。如果特别复杂植物,可以尝试在裂解液中加入PVP40至终浓度2%>。

     

    1. 将裂解物转入离心管,立即剧烈振荡15秒,短时放回 65°C水浴中(5-10 min),中间偶尔颠倒1-2次帮助裂解。13,000rpm离心10分钟,沉淀不能裂解的碎片。

     

    1. 取裂解物上清(在不超过基因组DNA清除柱能力的情况下可以取更多的上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。

     

    <若上清表面有漂浮物,用吸头挑开吸取下面液体即可>。

     

    1. 立刻接操作步骤的步骤3。

     

     

     

     

    1. 液氮研磨法(适用广泛,提取复杂难破碎,易降解样品时推荐此法):

     

    1. 液氮中研磨新鲜或-70°C冷冻的材料至细粉。

     

    1. 转移100-200mg细粉(水分少的样品可加100-150mg,水分多的样品可多加一些)加至预热的裂解液CLB(已加有β-巯基乙醇)离心管中。立即剧烈涡旋30-60秒或者用吸头吹打混匀裂解直得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。

     

    1. 短时放回 65°C水浴中(5-10 min),中间偶尔颠倒1-2次帮助裂解。

     

    1. 将裂解物13,000 rpm离心10分钟,沉淀不能裂解的碎片。

     

    1. 取裂解物上清(在不超过基因组DNA清除柱能力的情况下可以取更多的上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。

    <若上清表面有漂浮物,用吸头挑开吸取下面液体即可>。

     

    1.  立刻接操作步骤的步骤3。

     

     

    1. 将混合物 (每次小于720μl,多可以分两次加入)加入一个基因组清除柱中,13,000 rpm离心2分钟,弃掉废液。

     

    <确保离心后液体全部滤过去,膜上没有残留,如有必要,可以加大离心力和离心时间>

     

     

    1. 将基因组DNA清除柱子放在一个干净2ml离心管内(不用RNAse free 或者DEPC处理,一般干净的新离心管即可。也可使用RNA吸附柱配套的新的干净收集管),在基因组清除柱内加500μl裂解液RLT Plus,13,000 rpm离心30秒, 收集滤液(RNA在滤液中),用微量移液器较精确估计滤过液体积(通常为450-500μl左右,滤过时候损失体积应该减去),加入0.5倍体积的无水乙醇,此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。

     

     

    1. 立刻将混合物(每次小于720μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm离心2分钟,弃掉废液。

     

    <确保离心后液体全部滤过去,膜上没有残留,如有必要,可以加大离心力和离心时间>。

     

     

    1. 加700μl 去蛋白液RW1,室温放置1分钟,13,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

     

     

    1. 加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),13,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl漂洗液RW,重复一遍。

     

     

    1. 将吸附柱RA放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

     

     

    1. 取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase-Free H2O(事先在 70˚C水浴中加热可提高产量), 室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。

     

     

    1. 如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase-Free H2O重复步骤9,合并两次洗液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。

     

    <洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择>。

     

     

     

     




    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。