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M5 HiPer Yeast Plasmid Mini Kit 酵母质粒小提试剂盒
货号 规格 销售价
MF120-01 50T 698.00
  • 产品名称                             单位        货号

    M5 Yeast Plasmid Mini Kit     50T      MF120-01

     

     

    储存条件

     

    在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A后的Solution YP1应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。

     

     

    产品简介

     

    本试剂盒用于酵母高纯度质粒DNA的小量制备。菌体经碱裂解、高盐、低pH处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心吸附柱吸附。通过清洗液的洗涤可去除杂质,在低盐、高pH条件下洗脱,最后得到高达20 ug纯度较高的质粒DNA。

     

     

    产品特色

     

    快捷、高效:操作简便,得率高,节约时间。

     

    纯度高:沉淀致密,去杂干净。

     

     

    产品组份

     

    试剂盒成分

    50T

    Buffer BL

    25ml

    Solution YP1

    15 ml

    Solution YP2

    15 ml

    Solution YP3

    20 ml

    Buffer WB1

    13 ml

    Buffer WB2

    15 ml

    Buffer EB

    10 ml

    RNase A (10 mg/ml)

    150 ul

    MiniSpin Column With Collection Tubes

    50套

     

    注意:使用前将全部RNase A溶液加到Solution YP1中混合均匀,2 ~ 8℃保存;按要求在Buffer WB2中加入无水乙醇

     

     

    自备试剂

     

    山梨醇Buffer:用0.1M磷酸钠缓冲液 (pH7.4) 配制1.2 M山梨醇。

     

    0.1M磷酸钠缓冲液 (pH7.4) 的配制:77.4 ml 0.1 mol/L Na2HPO4+ 22.6ml 0.1mol/L NaH2PO4

     

    溶壁酶Lyticase、无水乙醇、RNase A(可选)。

     

     

     

    操作步骤

     

    取1-5 ml酵母培养物(不超过5×107酵母细胞),12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min, 尽量吸除上清(菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。

     

    酵母细胞壁的去除:向菌体中加入600 μl山梨醇buffer,加入大约50 U Lyticase,充分混匀。30℃处理30 min。4000 rpm(~1500×g)离心10 min,弃上清,收集沉淀。

    注意:以上为5×107细胞Lyticase用量,根据酵母的菌株和酵母细胞的数量不同,所用Lyticase的浓度和处理时间应进行适当调整

     

    加入250 μl Solution YP1(请先检查是否已加入RNase A)重悬沉淀。

    注意:以上Lyticase的用量和处理时间为经验值,根据酵母菌株和酵母细胞数量的不同,所用Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。

     

    加入250 μl Solution YP2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分混匀,室温放置5 min。

    注意:温柔混匀,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠。

     

    加入350 μl Solution YP3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀,12,000 rpm (~13,400×g )离心10 min。

    注意:Solution YP3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。

     

    小心地将上清液加入吸附柱中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

    向吸附柱中加入400 μl Buffer WB1(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,倒掉废液。

    向吸附柱中加入600 μl Buffer WB2(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

    重复操作步骤8。

     

    将吸附柱放入收集管中12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。

    注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸 附材料中残余的漂洗液。

     

    将吸附柱置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl Buffer EB,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min收集质粒。

    注意:通常酵母质粒拷贝数都很低,一般通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。通常建议使用1-5 μl 用作PCR模板检测。使用5-10 μl转化大肠杆菌。

     

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。