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M5 “长又亮”超保真酶(单酶,不带其他组分)
货号 规格 销售价
MF989-01 100U (100ul) 398.00
MF989-05 5x100U (500ul) 1868.00
  • M5 “长又亮”超保真酶(单酶,不带其他组分)

    使用说明书

     

    产品名称                                   单位         货号

    M5 “长又亮”超保真酶(单酶,不带其他组分)   100U       MF989-01

    M5 “长又亮”超保真酶(单酶,不带其他组分)   5x100U     MF989-05

     

     

    储存条件

    长期保存,请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。

     

     

    产品简介

    聚合美Magic Neo超保真DNA聚合酶在Magic超保真酶系列技术基础上,应用了聚合美特制的<延伸增强剂>,抑制<PCR停滞现象>,不仅保持了Magic超保真酶的高保真性,更明显提高了对粗样品模板的扩增效率。Magic Neo具有5’ 到3’ DNA 聚合酶活性和3’ 到5’ 的外切酶活性(即校读活性),能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象,在标准缓冲液中其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的50倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。同时该酶还具有快速的DNA合成速度,约相当于普通Taq DNA Polymerase的4-6倍、Pfu DNA Polymerase的8-12倍。该酶合成能力很强,即使是复杂的模板,也能快速准确的完成反应,尤其适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增,如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等,也可用于DNA片段的末端补平。使用聚合美Magic Neo超保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物无3’ 端突出碱基,不可直接用于TA克隆,可以用聚合美特制的平末端TOPO克隆(货号MF021和MF022)。

     

    单位定义

    用大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74˚C、30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量。

     

    产品组份

    M5 “长又亮”超保真酶(单酶,不带其他组分)  (1U/μl)        100 μl

     

    【质量控制】

    以λ DNA为模板,能有效扩增20 kb的DNA片段;以基因组DNA为模板,能有效扩增单拷贝基因;无内切酶和外切酶污染。

     

    适用范围

    高保真扩增,长片段的快速扩增,如基因克隆、定点突变等;高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增;粗样品的直接扩增

     

     

    操作示例

    按下表配制PCR反应体系:

    2×Magic Neo PCR Buffer                        

    12.5 μl

    2mM dNTPs

    2.5 µl

     Primer 1 (10 μM)                      

    0.5 µl

     Primer 2 (10 μM)                     

    0.5 µl

    Template DNA*  

    10-200ng

    Magic Neo High-Fidelity DNA Polymerase

    0.5µl

     ddH2O补足至

    25 µl

     

    建议的PCR条件

     

    95°C

    2 min. 

    32-36 cycles of:

     

    95°C

    25 sec. 

    53–64°C

    20-25 sec. 

    68°C

    15-30sec./1 kb

    68°C

    5 min. 

    保持 4°C forever

     

     

    <*模板量:10~200 ng 基因组 DNA,10~30 ng 质粒,或 1~2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。以上举例为常规 PCR 反应系统,仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系>。

     

    注意:大部分条件下,退火温度不需要特殊设置;在个别难扩的情况下,按Tm+3会有改善

     

     

     

     

                           

    常见问题解答(FAQ)

     

     

    Q1:我以cDNA做模板,为何扩增不到条带?

     

    A1:以cDNA做模板,扩增不到条带的可能原因如下:

    • 提取的RNA质量不好,部分或者完全降解,导致反转录得到的cDNA模板也是部分截断序列或者完全没有序列。模板质量不好,PCR扩增自然就失败了。
    • 目标基因在所提取组织中没有表达,或者表达量极低,导致反转录得到的cDNA中没有或者极微量的模板,在常规PCR循环数比如35个循环的条件下,扩增不到能够检测的条带。

     

    解决方案:以基因组DNA做模板,做个正对照(如果有内含子,要适当加大延伸时间)。

     

    如果正对照能扩增出来,就说明超保真酶和引物没有问题,是cDNA模板的问题,需要重新提取RNA做反转录。

     

    如果正对照也没有扩增出来,那有可能是引物降解或者引物失效的原因,重新合成引物。

     

     

    Q2:我的片段比较特殊,局部区域GC含量>80%用了很多品牌的超保真酶都没有扩增出来,怎么办?

     

    A2:对于高GC片段的扩增,除了做好正对照,排除引物和模板的原因,更需要摸索退火温度和PCR程序,采用touchdown程序有时会有改善,PCR体系中额外添加DMSO或者甜菜碱可能会有改善。此外,把延伸速度降下来,可能会对结果有所改善。

     

     

    Q3:如果我的是粗提样本做模板,怎么办?

     

    A3:对于粗提物做模板,需要将PCR速度降下来,比如正常是4-6kb/min,现在要降到1-2kb/min,对PCR成功率有很大改善。

     

     

    Q4:如果我的片段很长(>10kb,PCR程序该怎么设置?

     

    A4:对于超长片段扩增,PCR程序其他地方不需特别注意,只要注意议延伸速度比正常稍微慢点,但是比粗提物做模板要快点,一般2-3kb/min为宜。过慢的速度导致PCR反应的整体所需时间太长而导致超保真酶失活,过快的速度,不利于扩增长片段中可能存在的GC岛。

     

     

    Q5:“长又亮”Neo超保真酶的保真性如何?

     

    A5:其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的50倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。其实所有品牌超保真酶的保真性都差不多,不要被某些品牌说是Taq酶的200多,500多倍所迷惑,都是宣传噱头,因为大部实验,Taq酶的保真性就能满足。

     

     

    Q6:“长又亮”Neo超保真酶有mix形式吗?

     

    A6:其对应的mix货号是MF739。mix形式和单酶形式扩增能力差不多,只是在个别难扩的样本中,单酶可以添加DMSO或者甜菜碱来改善扩增。

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。