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M5 动物及多糖多酚双超mix(动物鼠尾及多糖多酚植物等难扩物种)
货号 规格 销售价
MF899-01 1ml 488.00
MF899-05 5x1ml 1978.00
MF899-10 10x1ml 3798.00
  • 尊敬的聚合美动物及多糖多酚双超mix粉丝:

     

     

    非常感谢您对聚合美的支持和对新事物的拥抱,使用前请认真阅读《温馨提示》和《操作说明书》。

     

     

     

    动物及多糖多酚双超mix (MF899)使用“温馨提示”

     

     

     

    • 动物及多糖多酚双超mix (MF899)含有三个组分:一个是裂解液叫“加强型扩增最佳伴侣”(MF859-plus),一个2xPCRmix叫“动物及多糖多酚双超mix”,还配带了一管ddH2O,方便使用。

     

     

    • 本产品免基因组DNA提取:“加强型扩增最佳伴侣”的作用是为了裂解细胞,释放出DNA当模板(请摸索最适合您实验的最佳伴侣和样本的比例关系:样本太多会超出最佳伴侣的处理上限,导致裂解不完全;样本太少会造成模板浓度过低,导致PCR失败)。因为裂解液在特殊的情况下需要20-50ul,而标准裂解是20ul处理体系,可能会有客户单独购买裂解液的需求,所以也可以单独购买。

     

     

    • 在您收到本产品后,打开包装,将“加强型扩增最佳伴侣”取出放在室温,使用前看看是否有沉淀,一定要确保裂解液没有沉淀,否则按说明书在37度溶解澄清后使用。

     

     

    • 样本处理量:菌液、菌体和液体样本,推荐是10ul处理体系。而植物和动物组织,推荐是20ul加入1-2平方毫米的样本,对于比较难处理的组织可以用50-100ul裂解液。务必采用适合的研磨方式来破碎组织,让细胞充分破裂释放DNA。

     

     

    • 研磨小技巧:1)将蓝枪头用火灼烧融化成自制的“研磨杵”,在2mlPCR管中研磨幼嫩组织或者昆虫;

                2)成熟叶片或较大组织,加入50-100ul裂解液在1.5ml 离心管中用研磨杵旋转挤压破壁;

                3)种子或很厚样本(杨树叶片)需要先用液氮研磨,再取少数样本加入50-100ul裂解液;

                          

    可以通过看裂解液的颜色来判断是否充分破碎

     

     

    • 沸水浴处理3-5分钟,如果实验室没有沸水浴,也可以用PCR仪98度处理3-5分钟

     

     

    • 12000rpm离心1-2分钟,取1-2ul做PCR模板,剩余的放在-20度保存一个月以上,以备后续再次检测。再次取出做模板时,务必12000rpm离心1-2分钟才能取上清1-2ul做PCR模板。

     

     

    • 本产品主要针对多糖多酚的植物样本(比如棉花、烟草、番茄、杨树和一些海藻)和动物鼠尾、脚趾等样本,在沸水浴冷却到室温,然后12000rpm离心2分钟取上清。

     

     

    • PCR程序设置:把PCR延伸速度降下来,平时是5-10秒/kb, 现在要变成30-60秒/kb, 因为在粗提物为模版的PCR中速度慢,好比类似在水里跑步和陆地跑步!

     

     

    • PCR循环数:CTAB提取的DNA纯度高,浓度大,而本产品处理的DNA模板是粗提物,循环数要比以前用CTAB模板增加2-3个循环,效果会好很多

     

     

     

     

     

     

     

    M5 动物及多糖多酚双超mix(无需提取基因组DNA)说明书

     

    产品名称                  单位          货号

    M5 动物及多糖多酚双超mix          1 ml         MF899-01

    M5 动物及多糖多酚双超mix       10×1 ml        MF899-10

    M5 动物及多糖多酚双超mix      100×1 ml        MF899-100

     

    储存条件

     

    动物及多糖多酚双超mix长期保存请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。

    直接扩增最佳伴侣,收到后置于常温保存,如果4˚C或-20˚C保存出现结晶,请将该试剂置于 37℃水浴中重新溶解后摇匀使用。

     

     

    产品简介

     

    本产品包含聚合美特制的加强型M5动物及双超mix直接扩增最佳伴侣,可以迅速裂解酵母、农杆菌、革兰氏阳性菌、放线菌等微生物的细胞壁,短暂煮沸后的液体可以直接作为PCR模板;同样可以用于动植物组织细胞样品的裂解,尤其是多糖多酚物种,是各种粗样品直接PCR的必备神器,可兼容普通Taq酶或高保真酶的下游PCR扩增。

     

    本产品包含聚合美特制Best W5 HiPer High-Fidelity DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂,浓度为2×。Best W5 HiPer High-Fidelity DNA Polymerase比普通Taq酶扩增效率高、错配率低,具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好、扩增速度快(30-60秒1kb)等优点。可最大限度地减少人为误差,可用于高特异性PCR反应及GC含量较高(>60%)具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR 产物是平末端,纯化后可直接用于TA 载体克隆(货号MF021或MF022)。 本产品有含红色染料,在PCR 反应完成后,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。红色染料可指示电泳进程,其迁移速度在1% TAE琼脂糖凝胶中与800 bp 双链DNA 片段相近。

     

     

     

    产品组份

                                     储存温度    MF899-01    MF899-10    MF899-100

    2x M5动物及多糖多酚双超mix      -20˚C         1 ml        10x1ml       100x1ml

    M5加强型动物及多糖多酚最佳伴侣   常温         2 ml        10x2ml       100x2ml

    Nuclease-free ddH2O               常温         1 ml        10x1ml       100x1ml

     

     

     

    适用范围

     

     1.基因检测:本产品不同批次之间误差很小,特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。

    2.用于从复杂模板中如基因组等扩增PCR产物,如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析(SNP)等。

     

     

     

    所需试剂

     

    使用者仅需准备PCR反应的模板和引物等。

     

     

     

    样本处理方法

     

    • 裂解液处理组织样品时取样切勿太多;

     

    B、裂解液处理后的用做PCR模板,加入的量不要超过PCR体系的1/10。

     

    1、 菌液样品

     

    将培养至对数生长期的菌液(酵母、革兰氏阳性菌、农杆菌、放线菌培养液等)以菌液和裂解液体积比1:2混合(5ul菌液:10ul最佳伴侣),直接沸水浴3-5分钟,短暂离心后取1-2µl作为后续PCR模板。

     

    2、 平板上的菌落

     

    用灭菌枪头挑取少量菌体,加入10 µl最佳伴侣,吹吸混匀,95 ˚C或沸水浴3-5 分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µl作为后续 PCR模板。

     

    3、血液或其他液体样品(尿液、组织液或者各种体液)

     

    以液体样本和裂解液体积比1:2混合(5ul样本:10ul最佳伴侣),95 ˚C或煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

     

    4、植物组织样品(幼嫩叶片,果实、种子、根组织等)

     

    棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘多糖多酚类样本,取2-3mm2样本加入30-50ul裂解液,将固体样品尽量研磨,煮沸5分钟,12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

     

    5、动物组织样品(鼠尾、鼠耳等组织)

     

    1-2mm2样本加入30-50ul裂解液,将固体样品尽量研磨,煮沸3-5分钟,12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

     

    6、 土壤等环境组织样品

     

    1-2mm2样本加入30-50ul裂解液,将固体样品尽量研磨,煮沸3-5分钟,12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

     

     

    PCR操作示例

     

    按下表配制PCR反应体系(冰上操作):

    Template DNA(上述步骤准备)  

    1-2µl

    2x M5 动物及双超mix (with red dye)                        

    10 μl

     Primer 1 (10 μM)                      

    0.5 µl

     Primer 2 (10 μM)                     

    0.5 µl

     Nuclease-free ddH2O补足至

    20 µl

     

    建议的PCR条件

     

    95°C

    3 min. 

    32-36 *cycles of:

     

    94°C

    25 sec. 

    55–64°C

    25 sec. 

    72°C

    30-60sec.** / kb DNA

    72°C

    5 min. 

    4°C

    forever

     

     

    PCR程序设置注意事项

     

    * 以粗提物为模板做PCR,因为模板量更少,循环数应比用CTAB提取DNA做模板PCR循环数多2-3个循环

     

    ** 以粗提物为模板做PCR,杂质比较多类似在水中跑步,降低扩增速度有利于得到稳定结果,建议延伸速度60秒/1kb

     

     

     

     

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。