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2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR Master Mix (without dye) 双子叶植物无色“育种Mix”
货号 规格 销售价
MF738-ND-01 1ml 138.00
MF738-ND-05 5x1ml 568.00
MF738-ND-10 10x1ml 968.00
MF738-ND-100 100x1ml 7968.00
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    产品名称                                         单位            货号

    2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (with Green dye)       1 ml    MF738-ND-01

    2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (with Green dye)     5×1 ml    MF738-ND-05

    2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (with Green dye)    10×1 ml          MF738-ND-10

    2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (with Green dye)   100×1 ml          MF738-ND-100

     

     

    储存条件

     

    长期保存,请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。

     

     

    产品简介

     

    本产品包含高纯度M5 SuperLight Taq HiFi DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂,浓度为2×。M5 SuperLight Taq HiFi DNA 聚合酶比普通Taq酶扩增效率高、错配率低,具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好、扩增速度快(10-15秒1kb)等优点。可最大限度地减少人为误差,可用于高特异性PCR反应及GC含量较高(>60%)具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR 产物的3’端附有一个突出的"A"碱基,纯化后可直接用于TA 载体克隆(货号MF019或MF020)。 本产品有不含染料,在PCR 反应完成后,需添加上样缓冲液才能上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。

     

     

    产品组份

     

    2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (without dye)    1ml

    Nuclease-free ddH2O                                   1ml

     

     

    适用范围

     

     1.基因检测:本产品不同批次之间误差很小,特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。

    2.用于从复杂模板中如基因组等扩增PCR产物,如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析(SNP)等。

     

     

    引物设计注意事项

     

    引物3’端最后一个碱基最好为G或者C;

    引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配;

    引物3’端应避免出现发夹结构,GC含量控制在40-60%之间;

    正向引物和反向引物的Tm值相差不超过1℃为佳,Tm值调整至55-65℃为佳;

    引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;

    引物A、G、C、T整体分布要尽量均匀,避免使用GC或者AT含量高的区域。

    避开引物内部或者两条引物之间有5个碱基以上的互补序列,两条引物的3’端避免有3个碱基以上的互补序列;

    引物设计完毕请使用NCBI BLAST功能检索引物特异性,以避免非特异性扩增产生。

     

     

     

     

    质量控制

     

    核酸外切酶残留检测:20 μl本品和0.6 μg λ-Hind III在37℃下孵育16 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

    核酸内切酶残留检测:20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

     

    功能检测:

    以10 ng人基因组DNA为模板,可以很好扩增2.6 kb的目的片段;

    以10 ng小麦基因组DNA为模板,可以很好扩增4 kb的目的片段;

    以10 ng烟草基因组DNA为模板,可以很好扩增1.3 kb的目的片段(AT含量为72%);

    以50 ng HeLa 细胞总RNA对应的cDNA为模板,可以很好扩增4.8 kb的目的片段。

     

     

     

    所需试剂

     

    使用者仅需准备PCR反应的模板和引物等。

     

     

     

    操作示例

     

     

    按下表配制PCR反应体系(冰上操作):

    Template DNA*  

    <1µg

    2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (without dye)                         

    10 μl

     Primer 1 (10 μM)                      

    0.5 µl

     Primer 2 (10 μM)                     

    0.5 µl

     Nuclease-free ddH2O补足至

    20 µl

     

    建议的PCR条件

     

    95°C

    3 min. 

    32-36 cycles of:

     

    94°C

    15-25 sec. 

    55–64°C

    15-25 sec. 

    72°C

    10-15sec. /1 kb DNA

    72°C

    5 min. 

    4°C

    forever

     

     

    <*模板量:10~1000 ng 基因组 DNA,1~30 ng 质粒,或 1~2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。以上举例为常规 PCR 反应系统,仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系>。